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说一说T100基因扩增仪由哪三个基本反应步骤构成

发布时间:2020-06-25   点击次数:108次
   T100基因扩增仪实际就是一个温控设备,能在95℃,55℃,72℃之间很好地进行温度控制。
 
  本质是体外核酸扩增,加热使双链DNA解开螺旋,在退火温度条件下引物同模板DNA杂交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物,重复“变性→退火→引物延伸”过程至25~40个循环,呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
 
  扩增时加入的引物利用荧光素进行标记,使引物和荧光探针同时与模板进行特异性结合,扩增结果通过荧光信号采集系统实时采集信号并输送到计算机分析处理系统,实时输出量化结果,这样的PCR仪叫实时荧光定量PCR仪。
 
  T100基因扩增仪的操作非常简便,接通电源,仪器自检,设置温度程序或调出储存的程序运行即可。
 
  T100基因扩增仪技术的原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于靶序列两端互补的寡核苷酸引物,由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成。
 
  1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备。
 
  2、模板DNA与引物的退火:模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链互补序列配对结合。
 
  3、引物的延伸:DNA模板-引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。
 
  重复循环变性-退火-延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一轮循环需2~4分钟,如此反复进行,每一轮循环所产生的DNA均能成为下一轮循环的模板,每一轮循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增1倍,PCR产物以2的指数形式迅速扩增,经过25~30轮循环后(2~3小时),理论上可使基因扩增109倍以上,实际上一般可达106~107倍。

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